1. 时间:2017-12-11
2. 样品:人体脐带组织
3. 仪器:主机 TL2010S中通量组织研磨仪(鼎昊源科技)
配件 2ml研磨管,12×2ml适配器(1对),直径5mm不锈钢研磨珠
4. 步骤:
① 将脐带组织分成等量的小块,分别装入2ml研磨管中;
② 在研磨管中分别加入2颗直径5mm的不锈钢研磨珠;
③ 在研磨管中分别加入300μm裂解液,盖紧管盖,置入2ml适配器中,将适配器固定在TL2010S研磨仪的摇臂上;
④ 在TL2010S操作面板上设置实验参数:
Speed(振荡速度):2000次/分钟
Cycle(循环次数):1次
RunTime(研磨时间):50s
启动研磨仪,一键自动研磨;
⑤ 研磨完全停止后,卸下适配器,取出研磨管,脐带组织已研磨成细腻的匀浆状;
⑥ 离心之后取上清液提取DNA,进行后续实验。
研磨总结:
针对于脐带、胎盘等韧性较大的动物组织,在摸索实验条件时,可以参照以下参数:
1. 研磨时加入适量溶液(裂解液或缓冲液);
2. 选用直径5mm或6mm的研磨珠,2ml的研磨管中加入2颗;
3. 转速1800-2000次/分钟;
4. 研磨时间30s-60s,设定梯度时间,找出合适的研磨时间。
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